產品簡介：

RT-LAMP MasterMix（熒光染料法）含有熒光 RT-LAMP 擴增所需的所有成分， 可以用于實時熒光 RT-LAMP 等溫擴增。 RT-LAMP 即 Revers Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification（逆轉錄-環介導等溫擴增），它利用 4 條模板專一的特異引物、逆轉錄酶和具有鏈置換能力的 Bs DNA 聚合酶，在等溫條件下(65℃左右)30－60 分鐘完成逆轉錄和 LAMP 擴增該技術在靈敏度、特異性和檢測范圍等指標上能媲美甚至優于定性 RT-PCR 技術，還不需要昂貴的儀器設備。目前已成功應用于生物的快速檢測，廣泛用于各  個領域。

產品特點：

1.即開即用，含有 LAMP 專用的熒光染料，可以進行實時熒光檢測（需要熒光 PCR 儀），但不建議用于定量分析。

2.含 UNG 防污染系統。

3.高特異性，精心優化的配方，非特異擴增比自配的試劑更低。

4.高擴增效率，一般比 RT-PCR 靈敏一個數量級。

5.65℃左右同時完成逆轉錄和等溫擴增，一步式操作。

6.本試劑盒足夠 50 次 20 ?L 體系的實時熒光 RT-LAMP 擴增。

7.提供擴增對照，便于在遇到困難時分析原因。

8.20 ?L 體系最多可以使用 13 ?L 樣本，減少漏檢。

9.UNG RT-LAMP MasterMix（熒光染料法）只能用于科研，不能用于臨床。

產品參數：

產品規格

成份規格包裝

UNG RT-LAMP MasterMix

（熒光染料法，待加酶）200 ?L0.5 mL 黃蓋管

逆轉錄酶-擴增酶混合液100 ?L0.5 mL 紅蓋管

LAMP陽性對照模板-引物混合物

22040250 ?L0.5 mL 藍蓋管

超純水，PCR 級1 mL1.5 mL 本色蓋

石蠟油，PCR 級1.5 mL1.5 mL 本色蓋

使用手冊1 份無

保存和運輸

低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

RNA 模板、RT-LAMP 引物

使用方法：

1. 制備模板RNA：用于選用合適的方法制備模板RNA。如果有N個樣品，最好設置N+2個樣品制備，多出的兩個一個是樣品制備陽性對照，一個是樣品制備陰性對照。

2.配制20×RT-LAMP引物混合液。

先加超純水將合成的HPLC級別的下列引物干粉稀釋到下表所標注的母液濃度，然后在一新的離心管中按表中所列體積加入各種引物母液和超純水，

最后得到0.1 mL的20×RT-LAMP引物混合液，此混合液足夠100次20 ?L體系的RT-LAMP擴增。如果需要配制的20×RT-LAMP引物混合液體積異于0.1 mL，則各成分的用量請按比例調整。引物混合液可以在-20℃放置2 年。

注：如果沒有Loop引物，則用水替代。

3.在冰上融化RT-LAMP MasterMix（熒光染料法，待加酶），混勻，稍離心。第一次使用時，請將100 ?L逆轉錄酶-擴增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix中并輕柔顛倒混勻1分鐘，然后再使用。如果有N個樣品，則在

N+2個反應管中加入以下組份， 多出的一管是RT-LAMP擴增陽性對照

（PC），一管是RT-LAMP擴增陰性對照（NC）：

成份N+2 個樣品管RT-LAMP

擴增 PCRT-LAMP

擴增 NC

UNG RT-LAMP MasterMix

（熒光染料法，加酶后）6 ?L6 ?L6 ?L

自備 20×RT-LAMP

引物混合液1 ?L不加1 ?L

陽性對照模板-引物混合物不加4 ?L不加

自備 RNA 模板1-13 ?L不加不加

補自備超純水到20 ?L20 ?L20 ?L

4.混勻，放熒光定量PCR儀器上65℃保溫90分鐘，每分鐘采集一次SYBR通道的熒光信號。

5.反應結束后，按下面的步驟處理和分析數據。

6.閾值的設定：LAMP 的閾值跟 LAMP 引物的專一性密切相關，因此新設計的引物需要先在不加模板的情況下進行 LAMP 擴增，測定其 Ct。Ct 最好沒有，如果有也最好不要低于 60（每分鐘采集一次熒光信號的話）。如果低于 60，則最好重新設計引物。

7.實驗有效性的判斷：如果閾值設定為 60，則樣品制備陽性對照和擴增陽性對照的 Ct 應該在 60 以內，樣品制備陰性對照、無模板陰性對照和無引物無模板陰性對照的 Ct 應該大于 60，否則提取實驗或擴增實驗無效。對無效的實驗不需要分析樣品的結果，需要尋找原因或跟廠家聯系。

8.如果實驗有效，則可以分析樣品的數據。樣品 Ct 小于閾值則判讀為陽性，大于閾值則判讀為陰性。

選擇我們的UNG RT-LAMP MasterMix（熒光染料法），就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！