產(chǎn)品簡介：

Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Tricine-SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離多肽的主要方法，但是單獨(dú)配制各種溶液十分繁瑣，同時(shí)其蛋白回收率低，跟后續(xù)質(zhì)譜分析不兼容，為此本公司在傳統(tǒng) Tricine-SDS-PAGE 電泳的基礎(chǔ)所，進(jìn)行了改良很升級，并推出本產(chǎn)品。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.一站式，即開即用，用戶不需單獨(dú)準(zhǔn)備各種成分，十分方便。

2.安全，免去了實(shí)驗(yàn)人員接觸粉末狀的劇毒物品丙烯酰胺。

3.電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實(shí)驗(yàn)。

4.分辨率高，只需要兩層膠（濃縮膠和分離膠）就可以達(dá)到過去三層膠的效  果（濃縮膠、隔離膠和分離膠）。

5.蛋白片段的回收率比常規(guī) Tricine-SDS-PAGE 高。

6.純化的蛋白可以用于后續(xù)的質(zhì)譜分析。

7.本產(chǎn)品可配 30 塊 14cm×14cm×0.75mm 的 mini 膠

8.Tricine-SDS-PAGE 電泳試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分規(guī)格包裝

丙烯酰胺/甲叉雙丙烯酰

胺干粉(29:1)60g250 mL 棕塑瓶

Tricine-SDS-PAGE

配膠液250 mL 本色瓶

TEMEDCAS:110-18-91.5 mL 棕色管

過硫酸銨CAS:7727-54-01 g1.5 mL 本色管

Tricine-SDS-PAGE上樣緩沖液，2×1 mL1.5 mL 棕色管

Tricine-SDS-PAGE電泳液干粉約 80g250 mL 本色瓶

使用手冊1 份無

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸和保存（上樣液需要-20℃保存），保存期為一年。

自備試劑

Milli-Q 純水或同等級別的去離子水、水飽和的異丁醇

使用方法：

以下操作以配制由4%濃縮膠和10%分離膠的體系為例子說明配制膠的流程。如果用戶需要調(diào)整膠的濃度，請按比例修改。

1.  配制 30%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液（29：1）(丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液簡稱 AB 溶液，下同)：直接在裝有 60 克丙烯酰胺和 3 克甲叉雙丙烯酰胺的瓶中加入 140 mL 自備的去離子水，擰緊瓶蓋后 37℃水浴，

其間顛倒搖晃多次，直到干粉全部溶解，得到 30% AB 溶液（99：1），

該溶液最好 4℃避光保存，在一個(gè)月內(nèi)用完。AB 溶液具有神經(jīng)毒性，一定要戴手套操作。

2.配制 3%的 APS（過硫酸銨）：按每 30mg 過硫酸銨干粉加 1 mL 去離子水的比例將去離子水加到裝有硫酸銨干粉的 1.5 mL EP 管中，搖晃到粉末全部溶解。此溶液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。過硫酸銨極其容易吸潮，沒用完的過  硫酸銨一定要擰緊蓋子。如果吸潮，可用自備的分析純過硫酸銨替代。

3.配制 10×Tricine-SDS-PAGE 電泳液：在燒杯中加入約 800mL 去離子水，然后加入本試劑盒提供的約 80g Tricine-SDS-PAGE 電泳液干粉， 65℃加熱攪拌溶解，用去離子水定容到 1000mL。每次使用時(shí)用去離子水稀釋 10 倍即得 1×Tricine-SDS-PAGE 電泳液。

4.配制 30 mL 10%分離膠（足夠灌兩塊 0.75 mm×14 cm×14 cm 膠）。

A)標(biāo)記 1 個(gè) 50 mL 的三角瓶，按下表的用量加入各成分：

成份用量

30%AB 溶液（29：1）10 mL

Tricine-SDS-PAGE 配膠液16.8 mL

離子水2.7 mL

B)混勻后真空脫氣 10-15 分鐘。

C)灌分離膠： 在分離膠瓶中加入 450 ?L 3%的 APS 溶液和 18 ?L TEMED 溶液，輕輕旋轉(zhuǎn)混勻。用吸管將分離膠溶液沿著一個(gè)隔條的邊緣加到玻璃板夾層中，直到溶液的高度距離玻璃上沿還有 1 cm。

D)蓋 1cm 高的自備水飽和的異丁醇或 70%乙醇使膠面跟氧氣隔絕（氧氣會抑制膠的凝固）。讓分離膠在室溫聚合 30-45 分鐘。

5.配制 10 mL 4%濃縮膠（足夠灌兩塊 0.75 mm×14 cm×14 cm 膠）。

A)在一個(gè) 50 mL 的三角瓶中，先按下表的用量加入各成分：

成份用量

30%AB 溶液（29：1）1.32 mL

Tricine-SDS-PAGE 配膠液1.52 mL

離子水6.85 mL

B)混勻后真空脫氣 10-15 min。

C)將 300 uL 新鮮配制的 3%的過硫酸銨溶液和 10 uL TEMED 溶液加入到溶液中，輕輕旋轉(zhuǎn)混勻。用吸管將積層膠溶液緩緩地沿著一側(cè)隔條邊緣加入到玻璃平板夾層中，直到夾層中的溶液離玻璃板頂部約1cm 高為止。

D) 插入 0.75 mm 厚的塑料梳子，再補(bǔ)加濃縮膠溶液填滿梳子間的空隙。注意避免產(chǎn)生氣泡。讓濃縮膠在室溫聚合 30-45 分鐘。

6.小心拔出塑料梳子，在上層和下層緩沖槽中加入 1×Tricine-SDS-PAGE電泳液，并用其沖洗加樣孔，去除沒有凝聚的丙烯酰胺溶液。注：本產(chǎn)品提供 10 升的電泳液干粉，將所有干粉溶解在 600-800 mL 去離子水中， 最后定容到 1000 mL 即得 10×電泳液，可以室溫放置，不需要滅菌，用時(shí)再用去離子水稀釋 10 倍成 1×電泳液。

7.在密封的螺蓋微量離心管中，用 2×Tricine-SDS-PAGE 上樣緩沖液按 1： 1 的比例稀釋蛋白樣品，于 0℃加熱 10 分鐘。注意：如果樣品是蛋白沉淀物，則加入 100 ?L 新稀釋得到的 1×Tricine-SDS-PAGE 上樣緩沖液溶解；如果樣品是蛋白稀溶液，蛋白濃度過低，可先濃縮蛋白質(zhì)再溶解。與Tricine-SDS-PAGE 上樣緩沖液混合后的樣品如未經(jīng) 70℃加熱滅活蛋白酶，切勿放于室溫。

8.上樣。如果后續(xù)用考馬斯亮藍(lán)染色，對于成分復(fù)雜的蛋白質(zhì)樣品，上樣量  最好為 20 uL（含 25-50 ?g 總蛋白質(zhì)）；對于只有一種或幾種蛋白質(zhì)的樣品，上樣量最好為 1-10 ?L。如果用銀染，上樣量可減少 10-100 倍。

9.電泳。125-150 V 恒壓電泳直到電泳指示劑到達(dá)膠板的邊緣。一般需要4-5 h。注： 本產(chǎn)品的 Tricine-SDS-PAGE 上樣液使用了考馬斯亮藍(lán) G-250 作為指示劑，其泳動速度比最小的肽還快。

10.終止電泳，取出凝膠進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)處理（最好用銀染染色，節(jié)約樣品）。  注意：考染或銀染時(shí)，基本步驟同蛋白 PAGE 膠染色，只是任何一步（尤其是固定步驟）的處理時(shí)間都不要超過 20 分鐘，否則多肽非常容易擴(kuò)散

出 PAGE 膠而降低檢測的靈敏度

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