產品簡介：

鈣黃綠素（Calcein）的 CAS 號為 1461-15-0，其分子結構式如下：

鈣黃綠素可用作 LAMP 可見光染料，其原理是在有Mn 離子存在的 LAMP 擴增體系，如果沒有 LAMP 核酸擴增發生，Mn 離子和鈣黃綠素結合，在紫外照射時不發熒光。如果有 LAMP 核酸擴增發生，則 DNA 合成時將產生大量焦磷酸，這些焦磷酸將優先跟 Mn2+結合，鈣黃綠素則跟體系中多余的Mg2+結合，在紫外照射時將發熒光。標準 LAMP 反應中的鎂離子濃度通常在 4-10mM 之間（跟引物濃度， dNTP 濃度相關）。其原理圖如下：

產品特點：

1. 即開即用，含有 Mn 離子，可以直接加入到含 Mn 的 LAMP 擴增體系中。

2.其最佳用量根據 LAMP 體系不同需要用戶自己優化，但一般需要終濃度為 0.5 mM 的 Mn 離子，Mg 離子終濃度跟標準 LAMP 反應的Mg 離子濃度一樣。

3.本產品足夠 1000 次左右的 20 μL 體系的 LAMP 反應。

4.LAMP 專用鈣黃綠素溶液，20×只能用于科研。

產品參數：

成份規格包裝

LAMP 專用鈣黃綠素溶液，1 mL2 mL 棕色管

使用手冊1 份1 份

運輸及保存

低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

無

使用方法：

1.將本產品放置在室溫融化 30 分鐘，震蕩 10 秒鐘，短暫離心后放冰上待用。

2.按下表設置 20 μL 體系的 LAMP 反應：

成份樣品管陰性對照

4×LAMP Mix5 μL        5 μL

自備 FIP 引物終濃度0.8 μM0.8 μM

自備 BIP 引物終濃度0.8 μM0.8 μM

自備 F3 引物終濃度0.2 μM     0.2 μM

自備 B3 引物終濃度0.2 μM     0.2 μM自備 Loop F 引物終濃度（可選項）     0.4 μM     0.4 μM自備 Loop B 引物終濃度（可選項）     0.4 μM     0.4 μM

自備模板 DNA1-100ng    不 加

Bst DNA 聚合酶(8 U/μL)1.5 μL1.5 μL MnCl2 溶液，5 mM2 μL2 μL

本產品1μL1μL

補水到20 μL20 μL

3.65℃保溫 1 小時。

4.LAMP 擴增后在紫外燈下檢測，有核酸擴增的將發熒光，管中液體顏色為黃綠色。沒有擴增的將不發熒光，管中液體顏色為橘黃色。典型的實驗結果如下（左邊的有擴增，黃綠色。右邊的沒有擴增，溶液顏色為橘黃色）：

5.也可以電泳檢測實驗結果（強烈不推薦此法，因為電泳時產生的氣溶膠非常容易污染環境，使得今后用同一引物擴增時產生假陽性）：取 5-10 μL 擴增產物和自備的上樣液混合，上樣，進行 2-3%的瓊脂糖凝膠電泳，有 LAMP 擴增的樣品將可見 LAMP 特征性電泳圖譜。

選擇我們的LAMP 專用鈣黃綠素溶液，20×，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！