產(chǎn)品簡介：

用高密度介質來分離動物軟體組織的細胞核是目前主流的方法，它是由Chauveau 于 1956 年發(fā)明，其原理是細胞核的密度較大，在高速離心條件下可在高密度介質（2.2mol/l 蔗糖溶液）中沉降下來，從而達到與細胞質其它成分分開的目的。該方法能通過一步離心得到較高純度的細胞核，得到廣泛應用。本產(chǎn)品就是在 Chauveau 方法的基礎上優(yōu)化改進而來。

產(chǎn)品特點：

1.基于密度梯度分離，可有效去除細胞質及其他細胞器，得到的細胞核純凈，

2.加進氯化鈣、氯化鎂、氯hua鉀等改變分離介質滲透壓的物質，減少了細胞核的脆性，增加了細胞核的完整性。

3.精心調節(jié)了介質的pH，防止細胞核在分離過程中的聚集，還能保持細胞核的精細結構

4.快速，整個操作過程僅需 1 小時即可完成（對一個樣品而言）。

5.提供染色試劑，可以在普通光學顯微鏡下檢測純化的細胞核的純度。

6.處理溫和，得到的細胞核中的大部分蛋白質都具有活性，可以用于膠遲阻實驗、酶活性分析細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究；也可用于超大片段 DNA 的純化。

7.不但適用于動物和植物培養(yǎng)細胞，還能用于實體組織（需要用 Dounce

或 Potter 勻漿器勻漿組織）。

8.一次微量提取足夠處理 0.1 克組織或 10E7 個培養(yǎng)細胞，本產(chǎn)品足夠 50

次微量提取。

9.細胞核微量制備試劑盒（蔗糖梯度法）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

細胞核純化溶液 A 成分一100 mL120 mL 本色瓶

細胞核純化溶液 A

成分二（干粉）約 20 g30 mL 本色瓶

細胞核純化溶液 B 成分一50 mL60 mL 本色瓶

細胞核純化溶液 B

成分二（干粉）約 100 g120 mL 本色瓶

使用手冊1 份無

運輸及保存

常溫運輸和保存，有效期一年。

自備試劑

手動或電動 Dounce 或Potter 組織勻漿器（研磨杵和套管的空隙最好為 0.1mm，如果小于細胞核的直徑，則會使細胞核破裂）、水平式低溫高速離心機、光學顯微鏡。

使用方法：

一、準備工作：先將細胞核純化溶液 A 的成分二（干粉）全部加入到細胞核純化溶液 A 成分一（溶液）中，搖晃溶解后得到 100 mL 細胞核純化溶液 A。將細胞核純化溶液 B 的成分二（干粉）全部加入到細胞核純化溶液 B 成分一（溶液）中，搖晃溶解后得到 50 mL 細胞核純化溶液 B。4℃ 放置不能超過 2 天，長期放置需要放-20℃。

二、微量細胞核分離（放量提取各試劑的用量可以按比例放大）：

1.對組織細胞：稱取 100~200 mg 新鮮組織（如動物肝臟、腦、心肌和植物葉片等），用自備的 PBS 或生理鹽水洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀或刀片將其剪為碎塊（最好大小為 1cm3，過小反而不利于勻漿）放入小容量Dounce 或Potter 玻璃勻漿器內。

2.對培養(yǎng)細胞：用自備胰-酶按標準方法消化培養(yǎng)細胞，PBS 洗滌，800×g 5~10 分鐘離心收集細胞，計數(shù)。每次微量提取需要 5×10E7 個細胞， 加入 1.0 mL 預冷的細胞核純化溶液 A 重懸細胞，然后轉移到小容量Dounce 或Potter 玻璃勻漿器內，

3.用 Dounce 或Potter 組織勻漿器在冰上破碎組織或細胞。如果用手動勻漿器，一般需要 20~30 次。如果用電動勻漿器，一般需要處理 3-5 次， 每次 5～10 秒鐘（轉速為 500 r/min）。

4.將勻漿液轉移到離心管中。如果勻漿液有可見的結締組織和未破碎的組織塊，可以用三層自備的紗布放在 1.5 mL 離心管管口，將勻漿液過濾進入離心管。

5.4℃，700-800×g 水平離心 5-10 分鐘。細胞核沉淀在收集管底部，棄上清。

6.加入 0.5 mL 預冷細胞核純化溶液 A 重懸沉淀。用預冷的勻漿器（用前需要將表面的組織洗去）重懸沉淀。

7.在水平型離心管中加入 0.5mL 預冷的細胞核純化溶液 B，然后靠管壁慢慢加入上步得到的重懸液。

8.在 4℃ 23000g 離心 30 分鐘，管底的沉淀即為細胞核。

9.小心吸棄上清液。注意：上清一般比較粘稠，最好倒立一段時間。

10.用 0.5 mL 細胞核純化溶液 A 重懸沉淀。

11.在 4℃ 1500g 離心 5 分鐘，吸棄上清，沉淀即為純凈的細胞核。可以直接使用，也可以加等體積的自備甘油，混勻后放液氮或-70℃保存。

12.用本方法一般可以從 0.1g 肝臟組織中純化到 1-2×107 個細胞核。如果后續(xù)試驗是Western Blot 和 2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解細胞核后上樣。

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