產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒，簡(jiǎn)稱 CCK-8(Cell Counting Kit-8)試劑盒，是一種基于 WST-8 的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。WST-8 是一種類似于 MTT 的化合物，在電子耦合試劑 1-Methoxy PMS 存在的情況下，可以被還原生成橙黃色水溶性的甲臜(Formazan)。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏 色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。
產(chǎn)品參數(shù)：
成分規(guī)格包裝
細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)溶液
100 次1 mL 本色管
使用手冊(cè)1 份無
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期 12 個(gè)月，避免反復(fù)凍融。
自備試劑
96 孔板，酶標(biāo)儀，420-480 nm 的濾光片
使用方法：
一、胞增殖及細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
1.在 96 孔板中接種細(xì)胞懸液(100 ?L/孔)，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔約 2000 個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔約 5000 個(gè)細(xì)胞。具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目， 需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等因素決定。
2.按照實(shí)驗(yàn)需要，進(jìn)行培養(yǎng)并給予 0-10 ?L 特定的藥物刺激，處理一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(例如:6，12，24 或 48 小時(shí))。
3.每孔加入 10 ?L 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為 200
?L，則需加入 20 ?L 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)溶液，以此類推。可以用加相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)溶液但不加細(xì)胞的孔作為空 白對(duì)照，若擔(dān)心所使用的藥物會(huì)干擾檢測(cè)，可以設(shè)置加相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液、藥物和細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)溶液不加細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。
4.在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育 1-4 小時(shí)，具體時(shí)間可以通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定。預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)可以在 0.5，1，2 和 4 小時(shí)后分別用酶標(biāo)儀檢測(cè)，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。注意：使用酶標(biāo)儀前需確保每個(gè)孔內(nèi) 沒有氣泡，否則會(huì)干擾測(cè)定。
5.用酶標(biāo)儀測(cè)定在 450 nm 處的吸光值，若無 450 nm 濾光片，可以使用420-480 nm 的濾光片。如果樣品為高渾濁度的細(xì)胞懸液，可以使用大于600 nm 的波長(zhǎng)，例如 650 nm，作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。
6.如果需要暫時(shí)不測(cè)定 OD 值，可以向每孔中加入 10 ?L 0.1M HCl 溶液或者 1% w/v 的 SDS 溶液，避光保存在室溫，24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。
二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
7. 細(xì)胞活力 = [OD(加藥) - OD(空白)] / [OD(0 加藥) - OD(空白)] × 100%。
8. 抑制率 = [OD(0 加藥) - OD(加藥)] / [OD(0 加藥) - OD(空白)] × 100%。
9.OD(加藥)：具有細(xì)胞、培養(yǎng)基、CCK-8 溶液和藥物溶液的孔的吸光值。
10.OD(空白)：具有培養(yǎng)基、細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)溶液，沒有細(xì)胞的孔的吸光值。
11.OD(0 加藥)：具有細(xì)胞、培養(yǎng)基、細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)溶液，沒有藥物
溶液的孔的吸光值。
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