產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

cDNA 第二鏈合成試劑盒的起始材料是已經(jīng)完成第一鏈 cDNA 合成的RNA-DNA 雜交鏈。其原理是用 RNase H 使 RNA-DNA 雜合鏈中的 RNA 產(chǎn)生切口，再用 DNA Polymerase I 通過(guò)切口平移(nick translation)反應(yīng)進(jìn)行 RNA鏈取代合成 cDNA 第二鏈，其示意圖如下:

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開即用，含有合成 cDNA 第二鏈的所有試劑，包括 RNase H、E.coli DNA聚合酶 1 和 DNA 連接酶。

2.一管式操作，不需要每次進(jìn)行純化，不丟失寶貴的樣品。

3.所得雙鏈 cDNA 可以直接用于后續(xù)的常規(guī) PCR、real-time PCR、cDNA文庫(kù)構(gòu)建、抑制性差減雜交等。

4. 本試劑盒足夠 10 次 80 uL 體系的 cDNA 第二鏈合成反應(yīng)。

產(chǎn)品參數(shù)：

名稱 規(guī)格包裝

5×cDNA 第二鏈合成緩沖液 160 μL0.5 mL 白蓋管

20×cDNA 第二鏈合成

酶混合液 40 μL0.5 mL 黃蓋管

0.2 M EDTA 溶液 60 μL0.5 mL 本色管

超純水 1 mL1.5 mL 藍(lán)蓋管

使用手冊(cè) 1 份無(wú)

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

cDNA 第一鏈合成試劑等

使用方法：

一、合成 cDNA 第一條鏈

本試劑盒不提供 cDNA 第一鏈合成試劑，用戶需自備相關(guān)試劑合成 cDNA

第一鏈。

二、合成 cDNA 第二鏈

1.在冰浴上向 10uL 已經(jīng)完成 cDNA 第一條鏈合成的反應(yīng)體系（逆轉(zhuǎn)錄體系） 中依次加入下表試劑，如果多于 10uL，請(qǐng)只取用 10uL：

注：克隆雙鏈 cDNA 一般需要平末端化，需要 T4 DNA 聚合酶處理步驟。PCR、SSH 等后續(xù)處理一般不需要把雙鏈 cDNA 平末端化，則可以跳過(guò) T4 DNA 聚合酶處理步驟，直接用 EDTA 終止反應(yīng)。

2.終止反應(yīng)：如果后續(xù)實(shí)驗(yàn)(如電泳)不擔(dān)心 EDTA 的影響，可以直接加入 4 uL 0.2M EDTA 溶液終止反應(yīng)，然后將樣品放-20℃長(zhǎng)期保存。如果后續(xù)實(shí)驗(yàn)

（如PCR 擴(kuò)增）不擔(dān)心 cDNA 的單雙鏈狀態(tài)，可以 95℃保溫 10 分鐘終止反應(yīng)。如果后續(xù)實(shí)驗(yàn)既受 EDTA 影響，又不能是單鏈 DNA，則可以用 PCR 過(guò)柱純化法純化。

3.電泳 5 μL 檢測(cè) cDNA 質(zhì)量。如果 cDNA 在 0.5-10Kb 的范圍內(nèi)呈模糊一片，則 cDNA 合格。如果沒(méi)看見 cDNA 或有其他異常，需查找原因后再繼續(xù)。

4.所得 cDNA 可以直接用于后續(xù)的常規(guī) PCR、real-time PCR、cDNA 文庫(kù)

構(gòu)建、抑制性差減雜交（SSH）等實(shí)驗(yàn)。

選擇我們的cDNA 第二鏈合成試劑盒，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！